組織研磨低溫均質(zhì)儀經(jīng)過大量樣品破碎測試后發(fā)現(xiàn),動物組織樣品相比其他樣品更難破碎,特別是一些內(nèi)臟組織、結(jié)締組織、心臟肌肉組織、肺部組織,一般很難用手工或者常規(guī)組織勻漿儀*破碎。因為這些動物組織樣品一般韌性較大,如果使用手工研磨或者組織勻漿儀,不僅一次處理量太少、易污染且難清洗,處理后的樣品還不夠均勻細致,達不到后續(xù)提取RNA等實驗的要求。
組織研磨低溫均質(zhì)儀實驗流程:
1.高溫滅菌預處理6mm不銹鋼研磨珠;
2.將滅菌處理過的研磨珠與研磨管適配器置入液氮中同時進行預冷處理;
3.將樣品從液氮中取出,在研缽中切割成約4-5mm寬的樣品小塊。
4.在2ml無菌圓底離心管(進口)中依次加入:預冷6mm研磨鋼珠1顆、切好的樣品塊1塊、預冷6mm研磨鋼珠1顆。
5.確保離心管中有2顆6mm研磨鋼珠和1塊樣品塊后,快速蓋好管蓋,對稱放入預冷的2.0ml研磨管適配器孔槽中。
6.將適配器固定在組織研磨破碎儀的兩個搖臂上,設(shè)置轉(zhuǎn)速1800rpm,時間120S(胰腺樣品180S),一鍵開始研磨。
8.研磨時間結(jié)束,卸載適配器取出離心管,在管中快速加入裂解液,然后按照后續(xù)RNA提取實驗步驟操作。
組織研磨低溫均質(zhì)儀一次性高速破碎多個內(nèi)臟樣品組織,不僅操作靈活方便,還能安全輕松地進行液氮冷凍研磨操作,保證了RNA提取等溫度敏感性后續(xù)實驗的順利進行。此外,避免了樣品間的交叉污染,省去了清洗儀器的繁瑣工作,對于樣品量巨大且需要無菌操作的實驗,無疑大大提高了效率。